Ветеринарная лаборатория Нуклеом cтатьи

ПЦР в ветеринарии

В настоящее время диагностика инфекционных заболеваний животных в ветеринарии остается острой проблемой. Поскольку традиционные, классически рекомендуемые в учебниках и методических пособиях иммунологические реакции(РСКА, РИФ итд) остаются малодоступными и не нашли широкого применения в ветеринарной среде, то в арсенале выбора средств для диагностики у рядового ветеринарного врача образовался некий вакуум. Фактически зачастую работа по диагностике и лечению вирусных и бактериальных инфекций строится на основании одних лишь клинических проявления того или иного заболевания и личного опыта врача. При этом молодым врачам-недавним выпускникам ветеринарной академии или иных вет ВУЗов, приходится особенно сложно при постановке диагноза. Разумеется рассчитывать на стопроцентную эффективность терапии в таких условиях невозможно. Но с появлением такого диагностического инструмента как ПЦР ситуация может быть радикально изменена в лучшую сторону, поскольку каждый ветврач и молодой и опытный может теперь или сформировать или скорректировать проводимое лечение, получив точный диагноз.  


Целью работы нашей лаборатории является внедрение новых методов диагностики, основанных на современных методах и тенденциях работы. Большая часть ветеринаров уже либо слышали, либо сами пользовались анализом называемым ПЦР.
ПЦР - (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics) - расшифровывается как полимеразная цепная реакция.
ПЦР - диагностика - это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний,
Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. "Небольшой фрагмент ДНК" - это несколько сотен пар оснований ДНК - кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор. Для ПЦР-диагностики инфекций достаточно небольшого фрагмента, поскольку любая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.
При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК "особенный" - он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.
Сама полимеразная цепная реакция используется для того, чтобы найденный фрагмент размножить, клонировать: чтобы однозначно "увидеть" эти фрагменты ДНК, к окончанию реакции их должно быть не мене 1012 фрагментов.


История открытия ДНК и разработки метода ПЦР
Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэри Мюллисом в 1983г. Открытие ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние 20 лет, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.
Появлению метода проведения полимеразной цепной реакции предшествовали определенные достижения молекулярной генетики: к тому времени уже были расшифрованы нуклеотидной последовательности геномов ряда микроорганизмов и выделены специфические.
Также появлению ПЦР много способствовало открытие уникального фермента ДНК-полимеразы (или taq-полимеразы). Именно этот фермент катализирует и "контролирует" все процессы во время проведения анализа методом ПЦР. Особенность этого фермента - он термостабилен, исключительно термостоек: он выдерживает нагревание до температуры кипения без потери активности, а "любимый" его температурный режим во время работы - 72оС. Многие реакции при проведении ПЦР идут почти исключительно при повышенной температуре.
Преимущества ПЦР
1. Прямое определение наличия возбудителей
2. Высокая специфичность
3. Высокая чувствительность
4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
5. Высокая скорость получения результата анализа
6. Возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций

Недостатки ПЦР
Тут сразу стоит сказать о наличии некоторой доли скептицизма в отношении ПЦР у некоторых ветврачей, по сравнению с медиками, у которых метод почти единогласно получил самое широкое одобрение. Классическим поводом для недоверия и настороженного отношения ветврачей в отношении ПЦР служат различные поводы:
• При сдачи одного и того же материала в две-три лаборатории от всех приходят разные результаты
• При явной клинической картине заболевания лаборатория упорно дает «-» то есть отрицательный результат
Стоит отметить, что причины описанных и других ситуаций могут быть разными и связаны в числе прочего со слабостью развития ветеринарной лабораторной работы в стране в целом, однако в числе главных причин возникновения проблем при диагностике стоит выделить две:
1. Высокий уровень генетической вариабельности выявляемых микроорганизмов.
ПЦР в медицинских учреждениях применяется лишь на одном виде-человеке, и преимущественно для анализа одного биоценоза-заболеваний передающихся половым путем. Это создает очень узкую биологическую нишу. В то же время в ветеринарии ареал исследования гораздо выше- для примера хламидиоз врачи сдают и из препуция кобелей, и при коньюктивите кошке итд. Таким образом, ареал микрофлор с которым приходится сталкиваться ветврачу несравненно шире чем в медицине. Отсуда же идут и очень большие вариации в геноме микроорганизмов. В приведенном примере при хламидиозе: из глаз хламидии имеют один генетический состав, а при вульвовагините –несколько иной и не факт что искомый участок ДНК, о котором говорилось выше, используемый для поиска и детекции хламидий, обнаружится и в том и другом случае и будет идентичен. А если еще принять во внимание то, что диагностика проводится на нескольких видах, и штаммы в каждой территориальной местности имеют свой, уникальный состав, то получается что зачастую диагностика затрудняется именно широтой скрининга необходимого массива генетических форм микроорганизмов. Для решения этой проблемы в перспективе должны быть разработаны тесты для каждого вида и для каждой биотопа в отдельности. Также следует заметить что в настоящее время диагностикумы в лабораториях апробированы и разработаны для диагностики инфекций кошек и собак, так что если возникает например необходимость сдать анализ от другого вида (кролика, хорька, птицы), то следует сразу быть готовым к высокой возможности ложноотрицательного результата.
2. Неопытность ветврачей в процессе взятия материала.
Зачастую ветврачи лишены возможности получить информацию не только относительно техники сбора материала, но и вообще какой материал в принципе надо брать на то или иное заболевание. Ниже описаны некоторые техники и правила взятия материала при той или иной клинической картине.
Несмотря на вышеуказанные трудности ПЦР остается наиболее доступным и совершенным на сегодняшний день приемом диагностики.

Количество материала для исследования:
Для ПЦР требуется очень мало материала-в случае с кровью достаточно 50 мкл (1/20 часть кубика) на диагностику до 10 инфекций, в случае смыва/соскобы необходимо количество материала с спичечную головку. В случае соскоба из глаза, брать необходимо гнойное отделяемое коньюктивы.
Классификация инфекций
Инфекции собак и кошек составляют несколько групп: системные, кровопаразитарные, офтальмологические, респираторные, дерматофитозные, половые, желудочно-кишечные и другие. В клинической практике ПЦР получила наибольшее распространение при диагностике системных заболеваний и заболеваний, вызванных инфекциями с выраженным тропизмом к клеткам цилиндрического эпителия (респираторные, глазные и половые инфекции). В отношении остальных групп инфекций ПЦР характеризуется меньшей популярностью.
Системные инфекционные заболевания вызываются как правило вирусной этиологией. В эту группу входят такие болезни как короновирусы, парвовирусы, токсоплазмоз, пироплазмоз, инфекционный гепатит, чума плотоядных. Для диагностики используется как правило кровь, хотя для некоторых инфекций-парвовирусы, короновирусы показано дополнительная сдача соскобов, из-за меньшего процента перекрестных реакций с вакцинальной ДНК, присутствующей в крови.

 
ПЦР в ветеринарии
В настоящее время диагностика инфекционных заболеваний животных в ветеринарии остается острой проблемой. Поскольку традиционные, классически рекомендуемые в учебниках и методических...
Анализ методом ПЦР
Полимеразная цепная реакция, или ПЦР является экспериментальным методом молекулярной биологии, позволяющим добиться увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты, или...
График работы 8 марта
Сообщаем что 8 марта и 23 февраля мы работаем в обычном режиме,без изменений...
10 причин выбрать лабораторию Нуклеом
  Стабильно высокое качество услуг. Полностью автоматизированное оборудование. Максимально возможный уровень автоматизации и механизации диагностического процесса. В нашей лаборатории мы постарались максимально...
Разработка системы генотипирования пород
Доводим до Вашего сведения что в настоящее время наша лаборатория занимается разработкой системы определения генетической основы ряда признаков. Данная услуга, как...
Токсоплазмоз у кошек
Токсоплазмоз и его опасность для животных и человека.   Токсоплазмоз – это инфекционное заболевание, которое обширно распространено как у животных, так...
График работы в праздничные дни
Уважаемые клиенты.В праздничные дни наша ветлаборатория работаем в обычном режиме, за исключением 31 числа-вызовы на курьера в этот день принимаются...

Ветеринарная лаборатория Нуклеом

                                                                      nukleom